TTC法,为目前国际上公认的较好的测定种子生活力的方法,其原理为氧化态的无色的氯化三苯基四氮唑接受了活种子呼吸过程中脱氢酶产生的氢,而变成红色的还原态物质。
有生活力的种子其脱氢酶的活性往往高,四唑接受氢离子还原为红色,而死组织不着色,故根据染色部位及染色深浅可以判断种子的生活力。
红四氮唑为白色或淡黄色的有毒粉末,宜放在暗处低温下保存。
用蒸馏水配成0.1%~1%浓度的溶液,用稀碱调pH至中性(如用0.05~0.1摩尔/升,pH7.5的磷酸缓冲液配制,调pH至6.8~7.2,效果更好)。
用棕色瓶放冰箱中保存备用。供试种子先浸泡16~24小时,然后沿种脊小心地将种子切成两瓣,放烧杯或培养皿内,切面朝下,滴入四唑溶液浸没剖面,放25~30C温箱内经8~24小时后取出冲洗净,观察染色反应,温度越高,染色越快。
如放在室温下需遮光,因四唑溶液对光敏感。
有生活力的种子胚染成红色,无生活力种子则不染色或仅有浅红斑点。