载体构造和选择的条件(载体填充的均匀程度主要影响什么)

载体构造和选择的条件(载体填充的均匀程度主要影响什么)

首页维修大全综合更新时间:2025-08-18 00:55:40

载体构造和选择的条件

载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒 DNA 是一种新的非病毒转基因载体。

载体选择主要考虑下述3点:
【1】构建 DNA 重组体的目的,克隆扩增/基因表达,选择合适的克隆载体/表达载体。
【2】.载体的类型:
(1)克隆载体的克隆能力-据克隆片段大小(大选大,小选小)。如<10kb 选质粒。
(2)表达载体据受体细胞类型-原核/真核/穿梭,E.coli/哺乳类细胞表达载体。
(3)对原核表达载体应该注意:选择合适的启动子及相应的受体菌,用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位;表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。
【3】载体 MCS 中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异,适应目的基因与载体易于链接,不能产生阅读框架错位。

①在宿主细胞中具有自主复制能力或能整合到宿主染色体上与基因组一同复制的能力;

②有合适的限制性酶切位点供外源DNA片段插入多种酶单一位点使载体在使用上具有较大的灵活性;

③分子量不宜过大以便于容纳较大的外源DNA片段并获得较高的拷贝数也有利于体外重组操作;

④具有合适的筛选标记以便区分阳性重组体和阴性重组体常用的筛选标记有抗药性、酶基因、营养缺陷

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