根据朗伯比尔定律得出：当一束平行单色光通过一定液层厚度的有色溶液时，由于溶质吸收了光能，光的强度就会减弱。溶液浓度越大，液层越厚，入射光越强，光被吸收的就越多。
如果用公式表示的话，就可以表示为表示为：A=E*C*L（A为吸光度，C为溶液浓度，L为液层厚度）。E是物质在一定波长下的特征
常数，与对光吸收的灵敏度呈正相关。该公式适用于有色溶液和均匀非散射的吸光物质（如：固、液、气）。在进行含量测定的时候，我们往往选择被测物质的最大吸收波长来作为使用波长，以防止外界干扰。于是，我们可以根据公式可以计算测定管中物质的含量，过程如下：
A1=E1*C1*L1 A2=E2*C2*L2
A1/(E1*C1)=A2/(E2*C2)
由于标准液和待测液中的物质相同，故E1=E2∴C2=(A2/A1)*C1因为标准液和待测液的体积相等，物质含量m=C*V*M（M为相对分子质量，V为体积）故m2=（A2/A1)*m1所以溶液中物质的含量m2。
分光光度计是一种利用物质对特定波长的光吸收特性进行定量分析的仪器。其计算公式为：
A = log(I₀/I)
其中，A表示被测物质的吸光度，I₀为入射光的强度，I为透过被测物质后射出的光的强度。对于可见光吸收分光光度计，常用波长为510nm的绿光进行测量。
当吸光度为0时，表示物质完全透过，无吸收；吸光度越大，表示物质对光的吸收越强。通过与已知浓度的标准物质进行比对，可以确定未知样品的浓度。
在实际使用中，分光光度计还需考虑光源的稳定性、检测器的线性范围、容器的透光性等因素，以获得准确可靠的分析结果。
