分光光度法目前使用的主流技术（分光光度法检测步骤）

紫外-可见分光光度计。

原理如下：

单色光辐射穿过被测物质溶液时，在一定的浓度范围内被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比，其关系可以用朗伯-比尔定律表述如下：

式中

A为吸光度；

T为透光率；

E为吸收系数，常用的表示方法，其物理意义为当溶液浓度为1%（g/ml）,液层厚度为1cm时的吸光度数值；

c为100ml溶液中所含物质的重量（按干燥品或无水物计算），g；

l（L）为液层厚度，cm。

上述公式中吸收系数也可以摩尔吸收系数ε来表示，其物理意义为溶液浓度c为1mol/L和液层厚度为1cm时的吸光度数值。在最大吸收波长处摩尔吸收系数表示为εmax。

物质对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。在一定条件下，物质的吸收系数是恒定的，且与入射光的强度、吸收池厚度及样品浓度无关。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后，可用同样条件将该供试品配成溶液，测定其吸光度，即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收，但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定，故又称之为比色分析。