蒙娜丽莎嘴角微皱，眉宇舒展，脸部则显示出了刚可察觉的微笑。这微笑似乎是从脸上掠过似的，既显示了她内心的激动，又没有失去安详的表情，显露了人物内心深处微妙的心理活动，引人遐想，令人神往。
不是吗？蒙娜丽莎的微笑，有时候让你觉得温文尔雅令人陶醉；有时仿佛内涵哀愁似显凄楚；有时候又略呈讽刺之状，虽则美丽动人却又有点不可接近。自从《蒙娜丽莎》问世几百年来，人们在她面前品味着，揣测着，争辩着，神秘莫测，令人百思不得其解。
当然，讨论蒙娜丽莎的笑容，关系创作者的艺术思想以及表现手法上。这个问题的探讨决不同于中世纪经院哲学家争论一枚针尖上可以站几个天使那样无聊。学者们是认真地探讨蒙娜丽莎微笑神秘莫测的原因的。
有的人从审美心理学的观点出发认为，同一件艺术品，不同的人或同一个人在不同的心境下观赏，往往会有不同的感受。人们凭借自己的生活经验，能从中不断发现作品的新含义。
有的学者如美术史家詹姆森，从美学角度指出，这种神秘微笑的造成是因为作者力图要在一个个形非常具体的人物身上，创造出他理想化了的美的典型；力图要是一闪即逝的面部表情，成为一种喜悦的永恒的象征。正是这种矛盾的结合产生出了令人觉得出奇的客观效果。
有的则从历史学家的眼光做出分析，说达芬奇笔下的蒙娜丽莎的微笑，显示了早期资产阶级的勃勃生机，对资本主义的明天充满了希望，她正是新兴资产阶级的真实写照。
有的画家则从绘画技巧上进行探讨，说达芬奇为这个坐在阳台上的少妇，设置了一幅透视不一的背景，当人们的视线集中在左边，感到远景下降而人物上升；反之，当人们集中到右边看时，感到远景上升而人物下降。画像中的人物五官，其位置亦在游弋不定之中。加上作者把体现人的笑容的嘴角岩脚部位，又画得若隐若现，界限不甚分明，这就使得画中主人公的微笑颇费猜疑。
有的研究者从医学角度，别出心裁地研究了蒙娜丽莎的“生理状况”，认定她患有内斜视。而现代派画家则坚持认为蒙娜丽莎应该是有胡须的，为此他大笔一挥，硬是给蒙娜丽莎嘴上添上了两撇八字胡须。令人观后啼笑皆非。
需要指出的是，不仅达芬奇笔下的蒙娜丽莎的微笑是神秘莫测的，而且有关画中主人公的身份、年龄以及该画真品究竟藏在何处，也莫衷一是众说纷纭，这就使得蒙娜丽莎的微笑越发显得扑朔迷离了.
