1.营养物质
包括水分、含碳化合物、含氮化合物、无机盐类和生长因子等。不同细菌对营养的需求不尽相同，有的细菌只需基本的营养物质，而有的细菌则需加入特殊的营养物质才能生长繁殖，因此，制备培养基时应根细菌的类型进行营养物质的合理搭配。
2.温度
细菌只能在一定温度范围内进行生命活动，温度过高或过低，细菌生命活动受阻乃至停止。根据细菌对温度的需求不同，可将细菌分为嗜冷菌、嗜温菌和嗜热菌三类，病原菌属于嗜温菌，在15~45°C都能生长，最适生长温度是37°C左右，所以实验室培养细菌常把温箱温度调至37°C。
3.PH
培养基的pH对细菌生长影响很大，大多数病原菌生长的最适pH为7.2~7.6，但个别偏酸，如鼻疽假单跑菌需pH为6.4~6.6,也有的偏碱，如霍乱孤菌需pH为8.0~9.0。许多细菌在生长过程中，能使培养基变酸或变碱而影响其生长，所以往往需要在培养基内加入一定的缓冲剂。
4.渗透压
细菌细胞需在适宜的渗透压下才能生长繁殖。盐腌、糖渍之所以具有防腐作用，即因一般细菌和霉菌在高渗条件下不能生长繁殖之故。不过细菌较其他生物细胞多渗透压有较强的适应能力，特别是有一些细菌能在较高的食盐浓度下生长。
5.气体
细菌的生长繁殖与氧的关系十分密切，在细菌培养时，氧的提供与排除要根据细胞的呼吸类型而定。少数细菌培养时需要二氧化碳等其他气体
