一、样品提取
鱼去鳞、皮,沿背脊取肌肉,粉碎均匀后,取鱼肉试样2 g(精确至0.01 g),加入2 g NaCl,再加入 15 mL 70%乙腈水,涡旋震荡10 min,超声提取10 min,以10000 r/min转速离心5 min,移取全部上清液至离心管中;将所得的上清液中加入等体积的去离子水,混匀,作为待净化液。
二、样品净化
活化:依次用3.0 mL乙腈和3.0 mL去离子水平衡MISPE柱;
上样和淋洗:移取所得样品提取液过柱,再用3.0 mL的水淋洗,弃去淋洗液;
洗脱:用3.0 mL甲醇-乙酸(9:1,V/V)洗脱,收集洗脱液;
重新溶解:洗脱液经氮吹浓缩至近干,用1.0 mL 乙腈溶解,过0.45 μm有机滤膜,进行上机测定。
注:整个过程控制流速不要超过1 mL/min。
三、 、仪器条件
液相色谱条件
仪器:UltiMate 3000(Thermofisher Scientific)
色谱柱:Agilent C18 (4.6 mm×250 mm,5μm)
流动相:乙腈:50mM乙酸铵(0.1%乙酸)=60:40
检测波长:620 nm
流速:1.2 mL/min
柱温:30 ℃
进样量:20 μL