1、种子试管育苗:取石斛成熟未开裂蒴果,经表面消毒灭菌后,将种子播于1/2MS培养基平板上,置25℃~28℃,加光培养,经1~2周,种子便开始萌发,转人装有固体培养基的试管内继续培养,经3~4次转管,当幼苗长出4~5片真叶并具有3~4条1~2厘米长的根时,即可炼苗后移栽。 据报道,石斛种子萌发、生长发育的不同阶段,对天然提取物的需求是不同的。种子萌发时香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不利影响,干扰其正
常发育过程,故在原球茎的增殖阶段,不需要添加天然提取物,也不必添加外源激素。而在原球茎的分化阶段,马铃薯提取液有良好的促进作用。在幼苗的生长阶段,香蕉提取物则有良好的壮苗作用。
2、茎尖育苗:取石斛当年萌生的嫩枝茎尖,经表面消毒后,接种于MS+NAA 0.2毫克/升+6-BA 0.5毫克/升(培养基的蔗糖浓度以2%为宜)上,置25℃~28℃加光照条件下进行培养,经30天诱导形成颗粒状愈伤组织,过20天形成不定芽(将愈伤组织和不定芽切开,再接种于上述培养基中会继续增殖并产生不定芽),然后接种于N6+10%香蕉汁中培养,当幼苗具4~5片真叶,并有3~4条根时,即可炼苗移栽。
3、茎段育苗:据研究,用带侧芽的石斛嫩茎段培养,以MS+6-BA
0.5毫克/升+NAA 0.2毫克/升诱导分化最佳,以附加6-BA 3.0毫克/升+NAA 0.5毫克/升增殖最适宜,以附加NAA 0.1毫克/升+1BB 0.3毫克/升对生根最有利。
石斛试管苗出瓶移栽,应在温度较高、湿度较大时进行。移栽基质为:碳砖4份+碎木炭1份+珍珠岩、蕨根适量。移栽后小苗放在阴湿且通风的地方,一周内不浇水以防湿度过大。