母种的制备
1、母种培养基配方
马铃薯(去皮)20%,葡萄糖2%,琼脂2%,水1 000毫升,pH值5.5~6。
2、母种的制备及注意事项
按配方准确称取原料,加热煮沸最后定容,分装试管,装入量约为试管长度的1/4~1/5,塞好棉塞。使用高压灭菌锅灭菌,在温度121℃、压力0.11Mpa下灭菌半小时,注意一定要放净高压灭菌锅内的冷空气。灭菌后,待培养基温度下降至60℃时,将成把的试管摆成斜面。注意,不要让培养基粘湿棉塞。
要严格按照无菌操作规程进行接种,然后置于恒温箱中25℃左右恒温培养10~15天。
原种的制备
1、原种培养基配方
马铃薯(去皮)20%、麦麸3%、葡萄糖2%、蛋白胨3‰、磷酸二氢钾2‰、硫酸镁1‰。
2、原种的制备及注意事项
马铃薯去皮切片后与麦麸一起煮沸20分钟,过滤定容,加入其它原料,全部溶解后装入三角瓶。三角瓶在使用前除清洗之外,还要进行空灭,灭菌方法与常规灭菌试管培养基相同。每个瓶中放入5~10粒玻璃球(直径0.5cm),用棉塞塞紧瓶口,再用牛皮纸包裹后扎紧。使用高压灭菌锅灭菌,在温度121℃、压力0.11Mpa下灭菌45分钟。
冷却后进行无菌接种,然后置于25℃恒温培养箱中静置培养72小时。摇床培养时,温度25℃,转速140转/分钟,培养时间72~96小时。