做流式细胞仪之前 如何固定细胞（流式细胞仪检测细胞示意图）

流式检测细胞周期操作步骤

1. 细胞培养： 取对数生长期的细胞，按1×106cells/ mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内，进行所需的处理（比如加入药物），特定时间后终止培养，进行下一步的实验。

2. 细胞固定：800rpm离心5min，收集细胞沉淀，弃上清，用预冷PBS洗涤两次，加入预冷75%乙醇，于4℃固定4h以上。

3. 细胞染色： 1500rpm离心5min，弃上清，以3mL的PBS洗涤一次，加入400uL的CCAA溶液（PI染液，engreen），100ulRNase A（100ug/mL ），4℃避光孵育30min。

4. 流式分析：以标准程序用流式细胞仪检测，一般计数2~3万个细胞，结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。