1.彼得·帕克
彼得·帕克是观众们最熟悉的蜘蛛侠，他本来是一名普通的记者，但是由于意外被一只受到放射性感染的蜘蛛咬伤，从而获得了超能力，便化身蜘蛛侠守护纽约城。在索尼影业出品的《蜘蛛侠》三部曲以及《超凡蜘蛛侠》系列和漫威电影中《美国队长3》以及《蜘蛛侠：英雄归来》和《复仇者联盟3：无限战争》中的蜘蛛侠都是彼得·帕克。
不过在《蜘蛛侠：平行宇宙》中，这次的主角并不是这位观众们都熟悉的彼得·帕克，而是小黑蛛迈尔斯·莫拉莱斯。
2.小黑蛛迈尔斯·莫拉莱斯
小黑蛛迈尔斯·莫拉莱斯，是彼得·帕克死后继任的第二任蜘蛛侠，他的超能力也是因为被一只携带有蜘蛛侠超能力的蜘蛛咬伤而获得，也就是他通过蜘蛛获得了蜘蛛侠的超能力。小黑蛛没有在任何影片中出现过，但是在电视节目《终极蜘蛛侠》以及《蛛网勇士》中曾有过精彩的表演。
3.蜘蛛格温
蜘蛛格温是来自与平行宇宙地球的格温·史黛西，她的超能力也是通过放射性蜘蛛咬伤而来。蜘蛛格温曾在《超凡蜘蛛侠》系列中出现过，与彼得·帕克的倒挂之吻堪称荧幕经典。
4.暗影蜘蛛侠
暗影蜘蛛侠的设定较为神秘，生活在20世纪30年代的经济大萧条时期，主要负责打击当时一些邪恶的黑暗组织，成为罪犯闻风丧胆的蜘蛛侠。
5.蜘猪侠
蜘猪侠不同于其他蜘蛛侠，因为他的的确确是一只猪。这只蜘猪侠来自地球8311，其的设定与彼得·帕克相差无几，是个记者，喜爱拍照，虽然个子小，但是很能打且热心肠。
6.佩妮帕克
佩妮帕克是一个朋克风蜘蛛侠，她的主要技能不是通过超能力，而是依靠科技的力量，她拥有一套可以操控的蜘蛛侠装甲，类似于钢铁侠的盔甲，所以在实力上她并不输于其他蜘蛛侠。
