请教一下 基因表达载体构建的原理和操作步骤

先回答你的问题，转入外源基因的农杆菌不能较载体，它本身是外源基因的受体，携带外源基因的质粒或者噬菌体才是载体。

你想问基因表达载体的构建，这个问题太大，而且表达载体多种多样，用处也很多，所以很难一下子概况。我只能大概说一下：

原理：将外源基因片段与载体连接（载体通常选用质粒或者噬菌体或其他病毒），将重组的载体转染受体细胞，使之整合入宿主基因组或者在稳定存在于胞质内，是宿主细胞能够表达载体上的外源基因，从而获得新性状或者新产物。

大概步骤：

1）从基因组或cDNA上克隆得到完整的目的基因（至少包含CDS区），通常在两端加粘性末端或重组位点

2）选择合适的表达载体（真核、原核、噬菌体、某些病毒、标记等）

3）将克隆得到的目的基因与载体连接

4）将重组载体通过某种手段转入受体，即宿主中（化学转染、脂质体、电转、显微操作等）

5）筛选阳性的宿主细胞并扩繁