酶的作用场所根据具体的反应过程来看，一部分酶作用在细胞外，像唾液淀粉酶等消化酶，而有一部分的酶的作用场所在细胞内，如参与细胞呼吸作用的酶其作用的场所就在细胞内。胞外酶会被分泌到细胞外，不是跨膜运输，用的是胞吞胞吐的方式。大多数酶是蛋白质，少数是RNA。
温度过高或0℃左右的低温都影响酶的活性，其影响的本质不同：温度过高使酶的空间结构遭到破坏，使酶永久失活，而低温使酶活性降低，但空间结构保持稳定，酶促反应速率可用生成物产生的速率来表示。
酶催化作用
酶是一类生物催化剂，它们支配着生物的新陈代谢、营养和能量转换等许多催化过程，与生命过程关系密切的反应大多是酶催化反应。酶的这些性质使细胞内错综复杂的物质代谢过程能有条不紊地进行，使物质代谢与正常的生理机能互相适应。
若因遗传缺陷造成某个酶缺损，或其它原因造成酶的活性减弱，均可导致该酶催化的反应异常，使物质代谢紊乱，甚至发生疾病，因此酶与医学的关系十分密切。酶的催化机理和一般化学催化剂基本相同，也是先和反应物结合成络合物，通过降低反应的活化能来提高化学反应的速度。
酶的活性部位（又称活性中心）酶的催化作用是通过其与底物形成复合物（即中间产物）降低反应能阈来实现的。酶是一个大分子蛋白质，而底物往往是小分子化合物，现已证实，酶分子表面不是任何部位都能与底物相结合的。只有称为酶的活性部位才能与底物结合并进行催化作用。
目录
活性中心
酶的活性部位：有些必需基团虽然在一级结构上可能相距很远，但在形成空间结构时彼此靠近，集中在一起，形成具有一定空间结构的区域，并能与底物特异地结合，将底物转化为产物。这一区域，称为酶的活性部位（Active site）。对于缀合酶来说，辅因子上某一部分的结构，往往是活性部位的组成成分。
作用
酶的活性部位在酶的催化机制中的作用：由于酶的活性部位与底物结合后，能使底物作用浓度相对增加，易于反应（称为邻近效应，Proximity）；或使底物功能基团受酶影响，作定向转移（Orientation），更有利于催化作用发生；活性部位内的催化基团提供质子或吸收质子，呈现酸碱催化剂的作用；或形成一个以共价键相结合的活泼中间物，降低活化能；或使底物分子中某些化学键受到牵拉变形而易断裂（又称底物形变，Strain，Distortion），这些因素相互配合，使催化效率大为提高。
