《蒙娜丽莎》最著名的是女人那缕神秘的微笑，是千百年来人们凝视和关注的焦点，但它真正的艺术价值却无论从哪方面来讲都是无与伦比，不能一笑了之。
《蒙娜丽莎》是一幅集万千宠爱于一身的巨作，它的价值首先体现在它的历史意义上。《蒙娜丽莎》是欧洲文艺复兴时期的扛鼎之作，是达芬奇花了至少四年的时间才完成的作品，是西方绘画史中第一个从宗教神话到描绘真实人物的传奇作品，完美的诠释欧洲文艺复兴时期“以人为本”的宗旨，历史意义非凡。
其次，《蒙娜丽莎》是一幅技术创新之作。作品的创新不单是绘画技巧的创新，还包括解剖、透视、光学、数学等科学技术的研究成果，把人与自然这两方面的研究成果融入绘画，在《蒙娜丽莎》里得到完美的结合。画面上，人物衣纹构成的浮线与折线同背景里流淌的河水交相辉映，而人物头发细小的波纹则宛如远处山崖瀑布下出下水流。而且达芬奇精心处理了所有物体的轮廓，以至于观者很难从中找到一条清晰而实在的边线。
这幅作品打动人心的不仅是人物的美，还有一种蕴藏着宇宙感的宏伟壮丽。这幅作品和文艺复兴时期其他巨作一起，将西方绘画从中世纪的僵硬中摆脱出来，使艺术更加真实，体现现实中人的美与伟大，充分展示了文艺复兴艺术的美学追求。
最后是《蒙娜丽莎》对后世的影响巨大，每年到卢浮宫鉴赏《蒙娜丽莎》作品的人数，大约有600万左右。关于这幅作品已经出现过无数的解释和传奇，是难以估量的惊世之作。
蒙娜丽莎的重要价值是成为艺术家非艺术家不分行业不分老少所有大众对绘画艺术关注、欣赏、思考和研究的开引话题。
