PCR是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法。PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,以合成的两条已知序列的寡核苷酸为引物,在DNA聚合酶的作用下,利用dNTP为原料,将位于两引物之间的特定DNA片段进行复制。
基因克隆的基本步骤:
一、获取目的基因片段;
二、选择克隆载体;
三、限制性酶切;
四、连接;
五、转化;
六、筛选阳性重组子。获得目的基因最常用的方法是从该基因的mRNA逆转录得到cDNA,作为PCR扩增目的基因的模版,实验中通常先从细胞中提取总RNA,再逆转录获得cDNA,PCR法扩增目的基因。因此,获取目的基因与PCR扩增目的基因在步骤一中完成。