切割目的基因和质粒的注意事项（目的基因与质粒反向连接视频讲解）

注意生物安全和实验室规定，进行必要的防护措施；需要筛选合适的内切酶，防止对目的DNA以外的部分进行切割；需要确保酶切后的目的DNA片段无污染，且剪切、接头和连接的酶反应条件和时间需要准确掌握；

4 需要选择合适的大肠杆菌质粒，考虑目的基因插入位置、拷贝数、抗性等因素；

5 进行质粒转化时需要根据实验需要选择合适的感受态大肠杆菌；

6 需要注意对实验用具的消毒和彻底清洗，避免污染实验

切割目的基因和质粒，最终目的是让这两者能够经DNA连接酶链接成为完整的表达载体。

1、目的基因的切割：

①选取的限制酶，其识别序列不可出现在目的基因内部，否则会破坏目的基因。

②为了避免目的基因自身环化（目的基因的两端被连接成环），一般切割目的基因时选取目的基因两侧产生不同末端的限制酶。

2、质粒的切割

①选取限制酶，要和切割目的基因的保持一致。要注意切割位点不可破坏所有标记基因，至少保留一个标记基因。（为了防止质粒自身环化，也是要求选择两种不同限制酶，最后要能与目的基因拼接）