您好 能否提供SOD CAT POD MDA的测定方法和具体操作时的注意事项啊(iaa试剂盒中和dtt使用方法)

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首页维修大全综合更新时间:2024-09-04 07:34:21

您好 能否提供SOD CAT POD MDA的测定方法和具体操作时的注意事项啊

采用NBT法测定SOD酶活性。在黑暗条件下,向小烧杯中分别加入:62.5mmol/l pH7.8磷酸缓冲液4ml、30mmol/ldl-甲硫氨酸0.2ml、3µmol/LEDTA0.1ml、1.125mmol/l NBT0.2ml、60µmol/l核黄素0.2mL,上述提取出的各处理的酶液0.05mL,以不加NBT和酶液但用缓冲液代替的混合液作为校零对照,测最大值时只不加入酶液但用缓冲液补齐,加完所有的物质后,在人工培养箱中用日光灯光照25分钟后,用分光光度计在波长560nm的情况下测定各管的OD值。以能抑制反应50%的酶量为一个SOD单位,其活力可由下面的公式计算:

  SOD活力(U/mg蛋白)= (对照管吸光度-测定管吸光度)/对照管吸光度/

  [(50%)×加入粗酶液中的蛋白质含量(mg)]

  3过氧化物酶(POD)的测定:

  0.05mol/L磷酸缓冲溶液(PBS)(pH=7.0)溶液的配制:10.9251g Na2HPO4•12H2O + 3.042975g NaH2PO4•2H2O,定容到1000ml。

  0.3%H2O2溶液的配制:吸2.5ml 30%H2O2,用0.05mol/L pH=7.0磷酸缓冲溶液(PBS)定容到250ml。

  0.2%愈创木酚溶液的配制:称0.5g愈创木酚,用0.05mol/L pH=7.0磷酸缓冲溶液(PBS)定容到250ml。

  2ml 0.3%H2O2溶液 + 0.95ml 0.2%愈创木酚溶液 + 1ml 0.05mol/L pH=7.0磷酸缓冲溶液(PBS) + 0.02ml??(原来为0.01)酶液(根加0.05ml酶液)(对照用0.05mol/L磷酸缓冲溶液代替酶液)(做三个重复),记录470nm处OD降低速度。将每分钟OD增加0.01定义为1个活力单位。(参考陈建勋,王晓峰主编的《植物生理学实验指导》P121)

  比色时加酶液,混合后即刻计时。

  04级 采用愈创木酚法测定POD酶活性。取光径1cm的比色杯2只,一只中加入反应混合液3mL,62.5mmol/l磷酸缓冲液1ml作为较零对照,另一只中加入反应混合液3mL,62.5mmol/l磷酸缓冲液0.9ml,上述提取得酶液0.1ml,立即开启秒表计时,于分光光度计470nm波长下测定OD值,每隔一分钟读数一次,以每分钟OD变化值表示酶活性大小,即以△OD470/min•mg蛋白质(或鲜重g)表示。

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