1.RNA在细胞内极易降解,样本选择时一定要选取新鲜的样本组织或者取样后迅速低温处理(液氮速冻);样本出现多次反复冻融后,RNA得率会严重下降,也会导致RNA降解;RNA提取环境要保持无RNA酶污染; 2.RNA容易受到环境污染导致RNA严重降解,建议实验过程中注意更换实验手套,使用所有耗材应该均无RNA酶的一次性耗材;
3.试剂盒中BufferEB(RNA专用)中含有少量EDTA,可能影响下游实验,使用时适当稀释,如果用其他洗脱液洗脱,要确保PH>7.5,PH过低影响洗脱效率;
4.离心柱漂洗完成后,尽可能烘干柱膜上残留乙醇,残留乙醇会影响洗脱效率和下游实验效果;柱膜也不建议过度干燥,没有乙醇味道残留最好,如果过度干燥可能影响RNA溶解;如果A260/230值过低,说明样本提取过程中漂洗不彻底,有盐离子残留,建议增加漂洗次数;
5.对于RNA提取,A260/280<1.9说明有可能存在DNA污染或者蛋白污染,如果洗脱样本时没有使用BufferEB,而使用ddH20(确保无RNA酶),比值或偏低,因为Ph值会影响吸光值,并不表示样本纯度低。